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中文名称:肾小球基底膜抗体检测试剂盒
英文名称:GBMELISA KIT
规格:96T/48T
保存条件:2-8℃
肾小球基底膜抗体检测试剂盒用 途:用于定量检测血清、血浆及相关液体样本中肾小球基底膜抗体 的含量。
间接ELISA方法用以检测血清中抗体,包被抗原为自己原核表达纯化蛋白,已通过琼脂扩散试验检验(纯化抗原与阳性血清有沉淀线,而阴性血清无)。用该抗原做方阵试验,抗原梯度为0.3,0.6,0.9,1.2,1.5,1.8,2.1微克,血清分别稀释1:5,1:10,1:50,1:100,1:200,1:300。步骤如下:
① 取空白酶标板,于每孔中加入纯化蛋白溶液100μL ,于振荡器上震荡混匀,用封口膜封盖酶标板,室温包被一夜。
② 取下封口膜,弃去酶标板内溶液,用洗剂液(1×PBST)洗剂酶标板5次,zui后一次吸干。每孔加入1%BSA封闭液100μL, 37℃封闭1h。
③取下封口膜,弃去酶标板内溶液,用洗剂液(1×PBST)洗剂酶标板5次,zui后一次吸干。每孔加入一抗血清100μL,37℃封闭1h。
④取下封口膜,弃去酶标板内溶液,用洗剂液(1×PBST)洗剂酶标板5次,zui后一次吸干。每孔加入酶标二抗兔抗羊IgG-HRP 100μL,37℃封闭1h。
⑤取下封口膜,弃去酶标板内溶液,用洗剂液(1×PBST)洗剂酶标板5次,zui后一次吸干。每孔加底物A 50μL和底物B 50μL,震荡混匀,室温显色10~15min。
⑥每孔加入终止液50μL,立刻在酶标仪450nm波长下读取OD值。线性范围的影响有两个因素:1、本身抗体的亲和力,亲和力越高灵敏度越高,高点与低点比值也就越高,若标准曲线的斜率接近于1,抗体亲和力还是可以的。比值没有相关规定说一定要高于64。
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