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大鼠磷酸化AKT蛋白(rat AKT)ELISA试剂盒检测所需时间不到5小时,数据性价比高,大多都有现货,种属齐全,提供免费代测、技术指导、*售后服务。
精密度:其批内CV%,其值应小于15%
产品别名:大鼠磷酸化AKT蛋白(rat AKT)ELISA试剂盒
英文缩写:rat AKISA KIT
安全性:对操作者和环境安全无害无传染性 ,
特异性:含有与待测物相近结构部份的物质可能存在交叉反应 ,
简便性:在定性实验中结果判断简单明了,定量试验结果计算也应简单
大鼠磷酸化AKT蛋白(rat AKT)ELISA试剂盒问:用制备好的单克隆抗体做ELISA试验,用的是间接、双抗体夹心、竞争法中的哪种方法啊?请各位老师指教。测的是抗原是不是?具体的操作应该是什么
答:用的是间接ELISA。
测的不是抗原,是抗体,看看产生的抗体是否与你的目的蛋白反应。
间接ELISA的操作很多书上都有的,看看这个吧:
间接ELISA的步骤
阳性克隆的筛选采用间接ELISA方法进行平行筛选。
大鼠磷酸化AKT蛋白(rat AKT)ELISA试剂盒包被: 首先以方阵法测得纯化重组蛋白的合适包被浓度,然后将蛋用pH9.6的碳酸盐包被液稀释至3ug/mL,每孔100uL包被ELISA板,4℃过夜。
洗涤: 将包被好的酶标板微孔中的液体全部弃去,并用PBST溶液洗涤3次,方法是先将每个微孔中加入300uL PBST溶液,放置3min后,将微孔中的PBST溶液全部倒出,再重加入相同体积新的PBST溶液,重复上面的操作,共3次。
封闭:用封闭液(PBST+5%小牛血清)4℃封闭12h。PBST洗涤3次,每次5min。
加*抗体:加入杂交瘤细胞的培养上清,100uL/孔,37℃作用2h,同时设立阳性、阴性及空白对照。
洗涤:弃去含*抗体的溶液,按照上述相同的方法用PBST溶液对酶标板进行洗涤。
大鼠磷酸化AKT蛋白(rat AKT)ELISA试剂盒加第二抗体:将酶标抗体按照使用说明中*的稀释倍数稀释于封闭液中,混合均匀后,向每个微孔中加入100uL,37℃温箱中温育1h。
洗涤:弃去含有第二抗体的溶液,按照上述相同的方法用PBST溶液对酶标板进行洗涤。
显色:加入新鲜配置的TMB显色液显色,37℃作用15min,之后用终止液终止反应。
记录:在酶标仪上测定OD450值。
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